Тверде живильне середовище Light Malt Extract Agar (LMEA) — це проста і популярна живильне середовище на агар-агарі. Вона використовується для вирощування грибів, бактерій та інших мікроорганізмів. Рецепт дуже доступний і включає всього три інгредієнти: світлий солодовий екстракт, агар-агар і воду.
Солодовий екстракт містить вітаміни, амінокислоти і мінерали, які забезпечують мікроорганізми всім необхідним. Агар служить основою, перетворюючи розчин у щільну гелеобразную масу. У підсумку виходить зручне середовище, на якій міцелій швидко зростає. Саме тому LMEA часто радять новачкам: приготувати її легко, а результат передбачуваний і стабільний.
Головна умова успіху — акуратність і стерильність. Всі етапи потрібно робити за правилами: правильно зважувати інгредієнти, стерилізувати інструменти і працювати в чистих умовах.
Що потрібно для роботи
Для приготування твердого середовища і посіву знадобляться:
- вода;
- сухий солодовий екстракт (LME);
- агар-агар;
- чашки Петрі;
- марля або паперовий фільтр;
- ємність для нагріву і змішування;
- скороварка або автоклав;
- інкубатор;
- инокуляционная петля або стерильні ватні палички.
Крок 1. Приготування середовища
Пропорції інгредієнтів:
| Вода | LME | Agar |
| 250 ml | 5 g | 5 g |
| 500 ml | 10 g | 10 g |
| 750 ml | 15 g | 15 g |
| 1000 ml | 20 g | 20 g |
Змішайте компоненти в ємності, добре розмішайте. Нагрівайте в мікрохвильовці 5-10 хвилин, дістаючи кожні 30-60 секунд і перемішуючи. Важливо довести розчин до закипання, але не кип’ятити довго.
Після нагріву можна профільтрувати суміш через марлю або паперовий фільтр (за бажанням). Потім перелийте розчин в банку з кришкою, в якій зроблено невеликий отвір, заклеєне пластиром.
Потрібно стерилізувати в скороварці близько 40 хвилин разом з чашками Петрі і інструментами для посіву (ватні палички). Після стерилізації дайте охолонути і підготуйтеся до розливання.
Крок 2. Розливання по чашках Петрі
Працювати потрібно максимально стерильно. Краще всього використовувати бокс для чистих робіт. Якщо боксу немає, можна обробити приміщення кварцовою лампою протягом 40-60 хвилин. Повної стерильності це не дасть, але знизить ризик зараження.
Остиглий агар розливають по чашках Петрі (приблизно 15-20 мл на чашку). Температура суміші повинна бути близько 40 °C: якщо гаряче — з’явиться конденсат, якщо холодніше — агар швидко застигне.
Після розливання закрийте кришки і дайте аґару повністю застигнути. Тепер середа готова до посіву.
Крок 3. Інокуляція
На агар можна висівати спори або використовувати споровую суспензія. Найважливіше — стерильність.
- Інструменти. Петлю перед роботою прожарюють до червоного кольору. Ватні палички можна використовувати одноразові, попередньо простерилізовати їх в скороварці.
- Спори. Їх можна нанести штрихами, буквою S або просто посипати з папірця. Штриховий метод допомагає краще розділити колонії.
- Спорова суспензію. Досить капнути кілька крапель розчину на поверхню.
Після посіву чашки заклеюють пластиром або омнипором по колу і ставлять в інкубатор при 28-30 °C (залежить від виду гриба). Перші ознаки росту міцелію зазвичай помітні вже через 3-5 днів.
Підсумок
LMEA — це простий і надійний спосіб отримати живильне середовище для роботи з грибами і мікроорганізмами. При дотриманні стерильності і правильних пропорцій можна добитися хорошого і стабільного росту міцелію навіть у домашніх умовах. У нас є також стаття про приготування рідкого живильного середовища.